植物類囊體膜提取試劑盒 Ver.760178-2.0
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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包裝
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RTU5002
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植物類囊體膜提取試劑盒
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10次
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● 產(chǎn)品組成：
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產(chǎn)品貨號
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產(chǎn)品名稱
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包裝
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貯存
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RTU5002-01
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類囊體膜提取緩沖液（5×）
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2×250 ml
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4℃
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RTU5002-02
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類囊體膜漂洗液
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100
ml
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4℃
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RTU5002-03
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類囊體膜溶解液
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120
ml
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4℃
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RTU5002-04
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類囊體膜增溶緩沖液
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5
ml
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4-8℃；配制后-20℃貯存
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RTU5002-05
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類囊體膜上樣緩沖液（10×）
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5
ml
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-20℃
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RTU5002-06
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BSA
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3
g
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4℃
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RTU5002-07
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過濾紙
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50張
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RT
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RTU5002-08
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過濾漏斗
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一個
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RT
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RTU5002-09
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1
M DTT
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2.5
ml
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4-8℃；配制后-20℃貯存
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說明書
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● 產(chǎn)品簡介：
葉綠體（Chloroplast）是質(zhì)體的一種, 是高等植物和一些藻類所特有的能量轉(zhuǎn)換器，是光合作用的反應(yīng)場所。在高等植物中葉綠體象雙凸或平凸透鏡，長徑5~10μm，短徑2~4μm，厚2~3μm。高等植物的葉肉細(xì)胞一般含50～200個葉綠體，可占細(xì)胞質(zhì)的40%，葉綠體的數(shù)目因物種細(xì)胞類型，生態(tài)環(huán)境，生理狀態(tài)而有所不同。葉綠體由葉綠體被膜(chloroplast envelope)、類囊體(thylakoid)和基質(zhì)(stroma)三部分組成，含有3種不同的膜：外膜、內(nèi)膜、類囊體膜和3種彼此分開的腔：膜間隙、基質(zhì)和類囊體腔。類囊體膜上含有光合色素和電子傳遞鏈組分，光反應(yīng)在此上進行，因此類囊體膜也稱光合膜。
本公司植物類囊體膜提取試劑盒采用差速離心方法可以從植物中提取到高純度的類囊體膜樣品。
1.
即用型試劑盒，用戶不需要單獨配制各種溶液。
2.
每次處理30g葉片計算,本產(chǎn)品可使用8-10次提取，每次能得到8-10 mg左右類囊體膜樣品。
3.
已經(jīng)成功用于擬南芥,綠蘿,菠菜,豌豆,煙草等植物，還可用于更多植物（可能需要優(yōu)化條件）。
● 貯存、效期及運輸：
4-8℃保存；一年有效；常溫運輸。
● 使用說明：
注意：類囊體膜對溫度高度敏感，所以整個操作必須在冰上或者在冷室進行，所用器皿和溶液均需要在4℃預(yù)冷。離心時一定要在4℃進行，離心力以g而不是rpm計算。如果需要研究類囊體膜的功能，提取過程還需要在昏暗的光線條件下進行。
需要自備材料：剪刀；50 ml尖底或圓底離心管;15 ml尖底或圓底離心管;勻漿機;低溫離心機。
1.1 材料預(yù)處理：
葉片在實驗前需先用自來水洗凈，再用蒸餾水淋洗，去掉多余水分。如果葉片采集后不能立即處理，則保存時需要保持葉片濕潤，即使如此，葉片采集后的放置時間也不能超過一天。
1.2
1×類囊體膜提取緩沖液（即用型）配制：
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1×類囊體膜提取緩沖液（即用型）
配制量150 ml
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類囊體膜提取緩沖液（5×）
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30 ml
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BSA
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150 mg
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1 M DTT
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150 μl
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滅菌水
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定容至150 ml
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冰上預(yù)冷待用，現(xiàn)用現(xiàn)配，不建議貯存
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注：一個30克樣品提取反應(yīng)需要 120 ml 1×類囊體膜提取緩沖液（即用型）。
1.3 葉片勻漿：
1.3.1 新鮮采集植物葉片（約30克），快速去除葉脈并將葉片剪成1-3 cm2大小的碎片并浸泡在120 ml的預(yù)冷的1×類囊體膜提取緩沖液（即用型）中（每克葉片加4 ml）。
1.3.2 將浸泡了葉片的溶液轉(zhuǎn)移到電動勻漿機（即家用制備果汁的勻漿機，可選貨號：RT-2243A）中，低速勻漿5秒，避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入勻漿機底部后，再低速勻漿5秒。注意：除電動勻漿機外，還可以選擇玻璃勻漿器和研磨（加玻璃珠）等裂解細(xì)胞的方法，但這些方法的單次處理量都比較小，需要將樣品分成很多小份單獨勻漿，然后再匯集。注：不要用液氮研磨，會損傷類囊體膜；不要過度勻漿，把葉片打碎即可，否則會降低類囊體膜得率。
1.3.3過濾勻漿液：2層過濾紙放于漏斗上，用漏斗將濾液收集到預(yù)冷的250 ml量筒中，一般分三次收集，總共可收集80-85 ml濾液，將濾液等分到4個預(yù)冷的50 ml的塑料離心管中（每個管中的濾液不要超過35 ml）。
1.4類囊體膜收集：
4℃ 4200 g離心15分鐘，小心棄上清，沉淀即為類囊體膜。
1.5 類囊體膜漂洗：
1.5.1 在類囊體膜沉淀中加入1 ml 預(yù)冷的類囊體膜漂洗液，手彈離心管底部使沉淀重懸；再補加1 ml預(yù)冷的類囊體膜漂洗液，徹底重懸沉淀。
注：重懸時最好避免溶液起泡，手指輕彈，或者用寬口吸頭輕柔吹打。
1.5.2 4度10000 g離心2分鐘，棄上清，保留沉淀。
1.6 類囊體膜重懸：
1.6.1 沉淀中加入1 ml的類囊體膜溶解液，手彈離心管底部使沉淀重懸；再補加1 ml預(yù)冷的類囊體膜溶解液，徹底重懸沉淀。
1.6.2 4℃10000 g離心2分鐘，上清為可溶性蛋白（根據(jù)實驗需要保留），沉淀為類囊體膜組分。
1.6.3 沉淀中加入1 ml類囊體膜溶解液，輕柔重懸沉淀，合并4管溶液，即為最終得到的類囊體膜溶液，約4 ml。
1.7 類囊體膜溶液定量：
通常類囊體膜蛋白含量用單位葉綠素含量來表示，即x μg 葉綠素/ml 類囊體膜溶液。
1.7.1
取5 μl 類囊體膜溶液加入到995 μl 96%乙醇溶液中，混勻。
1.7.2 10000 g 4℃離心2分鐘，吸取上清，測定OD665和OD649 吸光值，用96%乙醇做空白對照。
1.7.3
根據(jù)以下公式計算葉綠素：
葉綠素濃度（μg Chl/ml）=200×（18.08×OD649+6.63×OD665） 注：200為稀釋倍數(shù)。
1.8 類囊體膜貯存：
將類囊體膜樣品用類囊體膜溶解液稀釋到濃度為1mg Chl/ml，根據(jù)需要適量分裝，如50 μl/管，-80℃保存。
1.9 類囊體膜樣品溶解和電泳：
類囊體膜增溶緩沖液配制：
將2.5 ml增溶緩沖液（2×）全部加入到增溶劑粉末中，加入滅菌水定容至5 ml，徹底混勻，即配成5 ml增溶緩沖液，適量分裝，-20℃貯存，盡量避免反復(fù)凍融。
1.9.1 取50 μl(濃度為1 mg Chl/ml)類囊體膜樣品, 4℃ 16000 g離心5分鐘，棄上清。
1.9.2 沉淀中加入50 μl類囊體膜增溶緩沖液重懸樣品（此時樣品濃度為1 mg Chl/ml），輕柔混勻，避免產(chǎn)生大量氣泡，冰浴10 min； 4℃ 16000 g離心15 min；上清為綠色，有微量沉淀。 注：如上清為無色，說明增溶不好。
1.9.3 取上清移至新管中(大約可以取到45 μl上清)，加入1/10體積的類囊體膜上樣緩沖液，BN-PAGE 3-12%或4-16%梯度膠電泳（貨號：RTD6139-0312或RTD6139-0416），上樣體積5-15 μl。
1.10
實驗示例：
RTU5002 植物類囊體膜提取試劑盒發(fā)表文章列表
1. [2025 IF=14.1] Photo-Empowered Macrophage-Based
Drug Delivery System Overcomes Motility Suppression and Significantly Enhances
Deep Tumor Drug Delivery.
Author: Zhaoming Fu, Xin Cui, Shanshan
Liu, Lu Gao, Yingang Sun, Yujun Chen, Mianlong Li，Yuxin Fan, Jing Kuang, Wen Song, Feifan Zhou
Journal: Adv. Sci. 2026, 13, e15349
Institution： Hainan University
Paper link： https://doi.org/10.1002/advs.202515349