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Anti-Lamin B1抗體(兔單抗)

Anti-Lamin B1抗體(兔單抗)

產(chǎn)品編號:RGL1150

產(chǎn)品規(guī)格:20μl

數(shù)量
價格 ¥500

Anti-Lamin B1抗體(兔單抗)

Anti-Lamin B1 Antibody(Monoclonal Antibody from Rabbit)

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

RGL1150

Anti-Lamin B1抗體(兔單抗)

20 μl

產(chǎn)品簡介

Lamin B1是由LMNB1基因編碼一種核纖層蛋白質(zhì)。在動物細胞中,3種基因編碼了至少7種核纖層蛋白。LMNA基因通過可變剪接編碼A型和C型核纖層蛋白,而LMNB1和LMNB2分別編碼核纖層蛋白B1和B2。B型核纖層蛋白存在于每個細胞。A型核纖層蛋白在原腸胚形成后表達,C型核纖層蛋白的表達是組織特異性的。在核纖層蛋白中,核纖層蛋白B1往往被用作核被膜內(nèi)參。核纖層蛋白B1在物種間是高度保守的,分子量為~68kD。

來源

用途及稀釋比例

抗體類型

Lamin B1分子量

Rabbit

WB 1:1000-5000

IHC 1:200-1000

IF 1:200-1000

單克隆抗體

~68 kD

注:WB, Western blot; IHC, Immunohistochemistry; IF, Immunofluorescence

貯存形式:

穩(wěn)定溶液,1 mg/ml 抗體溶于PBS,50%甘油,pH7.2。

保存及運輸條件:

-20℃保存,一年有效;避免反復(fù)凍融;濕冰運輸。

使用說明:

1. Western Blot雜交(ECL顯色):1:1000-5000稀釋,常溫孵育1-2 h或4℃過夜。

2. 免疫熒光(IF)和免疫組化(IHC):1:200-1000稀釋。


實驗示例:

1 變性檢測:


總蛋白提?。?/span>5×106 K562細胞,400 g 離心收集,去上清,沉淀中加入200 μl RIPA(加2 μl 100 mM PMSF),冰上裂解5分鐘,4℃ 16000 g 15 分鐘,上清即為總蛋白(TP)。

電泳:4-15%RealPAGE Tris-Glycine預(yù)制膠(貨號:RTD6117-0415);1×TGS 200V 55min

轉(zhuǎn)膜:0.45μm PVDF膜,1×RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液 400 mA 40 min,電壓變化85-68 V

封閉:Western快速封閉液(貨號:WR5020) RT封閉 10 min

 

一抗: Anti-Lamin B1抗體(兔單抗)(貨號:RGL1150) 1:3000,RT 60min

 

       Anti-GAPDH抗體(兔單抗)(貨號:RGA1150) 1:10000,RT 60min

 

二抗:HRP標(biāo)記羊抗兔gG(貨號:HGR1020)1:5000 RT 60min

 

ECL發(fā)光:RealECL發(fā)光液(貨號:EC2520);化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)(貨號:RT523)曝光1秒。

2 非變性檢測:


實驗程序:

樣品提取:K562細胞 1×107細胞,400 g 離心3 min收集,1×PBS清洗2次,細胞沉淀中加入0.6 ml
非變性裂解液(貨號:RL1080),輕柔懸浮細胞,4度冰浴15min,間歇混勻,
4度 16000 g 15 min,收集上清。
電泳上樣樣品制備:BCA蛋白濃度測定試劑盒測定濃度(貨號:RTP7102),
樣品加入4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液(貨號:PL114 ),調(diào)配為0.3 μg/μl上樣液,
上樣40 μl(12 μg)。
樣品1:RL1080提取樣品,加終濃度0.125% G-250(5% G-250染料,貨號:BC260);
樣品2:RL1080提取樣品,不加G-250;
樣品3:RL1080提取樣品使用離心式去垢劑去除柱(貨號:DD0550)去除去垢劑,
樣品4:柱式動物胞漿蛋白提取試劑盒(細胞樣品,非變性提取,不含去垢劑)(貨號:RTD8106)提取樣品;
凝膠制備:Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(手灌膠)(貨號:RTD6140)
制備10% 厚度1.5 mm凝膠;
電泳:使用10×BN電泳緩沖液(貨號:BC500P)。開始電泳用1×藍色BN電泳緩沖液(0.02%G250),
恒壓200 V 51min后,換無色1×BN 電泳緩沖液,電泳時間共104 min
凝膠預(yù)處理:凝膠浸泡于1×BN轉(zhuǎn)膜緩沖液+0.1%SDS中 搖床慢搖10 min
濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜:用10×BN轉(zhuǎn)膜緩沖液(貨號:BC600P)配制1×BN轉(zhuǎn)膜緩沖液+20%甲醇,用0.45 μm 
PVDF,恒流200 mA(電壓變化114-83 V) 2小時,未冰?。ň彌_液水溫36度)。膜用無水甲醇去除藍色
封閉:Western快速封閉液(貨號:WR5020)快速封閉 10 min
GAPDH檢測:GAPDH 兔單抗(貨號:RGA1150) 1:10000 過夜孵育;
羊抗兔IgG-HRP 1:5000(貨號:HGR1020) RT 1h,ECL 1秒
抗體清除:PVDF膜用Western一抗二抗去除液(弱堿,溫和型)(貨號:WS1200) 清除30min,
Western快速封閉液(貨號:WR5020)快速封閉 10min。
Lamin B1檢測:Anti-Lamin B1抗體(兔單抗)(貨號:RGL1150)1:3000 RT 1h,
羊抗兔IgG-HRP 1:5000(貨號:HGR1020) RT 1h,ECL 8秒





 
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